篩菌過程

前言

        我們千里迢迢的前往台中做實驗!很幸運的我們有實驗室可以實作~~這要謝謝林宇宏會長幫我們借到實驗室。這項實驗的每一個步驟都必須小心翼翼，稍有疏失，結果就會出現問題。對於操作細節和動作，更是馬虎不得!準備好了嗎?

實驗開始!(圖片皆為自行拍攝)

前往實驗室!!(自行拍攝)

配置培養基

培養基

        我們使用了兩種培養基，第一種是「Nutrient agar(自然培養基)」為廣效型的培養基，適合多數的微生物生長，第二種是「Skim milk agar(脫脂牛奶培養基)」，是為了要篩檢具有分解蛋白質能力的菌種，此培養基本身為乳白色，若該菌種能分解蛋白質，就會在菌落周圍出現透明圈。

↑脫指奶粉、蛋白凍、酵母抽出物、 葡萄糖、洋菜粉(上至下)	↑中興大學的教授調的配方	↑自然培養基的粉末

高壓滅菌釜

溫度要121度，殺菌20分鐘。等溫度降到90度，壓力表要指到「0」才可開啟取出。

PS.20分鐘是指溫度升到121度才開始計時。整個過程要等1.5小時左右。

↑桌上好多瓶瓶罐罐，得小心翼翼地動(自行拍攝)	↑要送去蒸汽殺菌釜了(好像裝牛奶的籃子)
↑蒸汽殺菌釜(自行拍攝)

進無菌操作台前一定要先用酒精消毒過!P.S我們自己調配了75%的酒精~~

接下來，我們要把所有實驗會需要用到的器材噴上酒精。要確實消毒才能送進無菌操作台!!

↑75%的酒精(自行拍攝)	↑噴酒精(自行拍攝)

倒入培養液

在無菌操作台中將滅菌完成的培養液倒入培養皿中，倒好開UV晾乾30分鐘等待其凝固。

↑晾乾中，滿滿的培養皿(自行拍攝)	↑會長正倒入培養液(自行拍攝)

塗盤

開始在已經凝固的培養基上塗盤。

我們的臭滷水稀釋到十的負八次方!!!因為第一次做臭滷水實驗，並不清楚它養出來的菌數量究竟多少，為了保險起見，我們決定做到十的負八次方。

塗好後，將培養皿以parafilm封起來，培養皿要倒放，如果以後產生水氣，就不會流到培養基上，影響結果。

↑將培養皿標上日期、稀釋倍數等資訊(自行拍攝)	↑上：Parafilm封口膜。下：滅菌貼。(自行拍攝)

培養

培養環境

        培養的環境須維持在28度，因為我們沒有專業的培養箱，所以我們使用電暖爐加上溫度控制器來維持28度的培養環境~利用身邊現有的物件，來解決眼前的困難，只要溫度降低，電暖爐就會啟動加熱，一到達溫度便停止。

切記!!培養皿要倒放!!!

結果

        這些就是我們培養出來的菌~令人驚奇!培養皿上產生了很多小水珠!!有倒放，有保庇，果然按照正確步驟很重要，否則辛苦實驗了一整天的心血就毀了~真的長的超級多，肉眼其實可以分辨出來它們的不同，但光是從照片看，沒辦法看的很清楚!

菌落數量

        培養皿上有綠的，有藍的，還有粉色的，很多很多!!每一個菌落都是由一個細菌不斷分裂長成一個菌落，當稀釋倍數越大，菌落就越來越少，計算菌數時，要選菌落數25-250的來計算，計算方式：(菌落數×稀釋倍數×10)即可得到菌數(CFU/ml)(CFU, colony forming unit)。舉例來說，假設稀釋倍數10的負3次方那盤菌落數60顆，當初加菌液0.1ml去塗盤，所以原菌數為60×1000×10=600000(CFU/ml)…我們挑了一些菌落數適當的稀釋倍數來做觀察和計算。

菌落形態觀察

        我們使用學校的解剖顯微鏡來觀察菌落。都是小水珠!!我們試圖尋找那些藍點、綠點，但顯微鏡底下看起來有色差，所以還是找不太到。老師好不容易借到一台好一點的高級相機，能夠把這些菌落拍下來。菌落外觀有的是圓形光滑，有的是根狀。

↑長微生物的培養皿(自行拍攝)	↑菌落放大(自行拍攝)	↑右上有透明圈

後記

       但礙於時間與實驗設備，很可惜無法再做二階段的測試觀察，不過，第一次自己把菌養出來已經讓人很驚奇了，也知道原來設計實驗和操作實驗有那麼多眉眉角角，真是不容易啊，不過也很有成就感，希望以後有機會能繼續研究下去。雖然我們無法得知那是什麼菌，老師說，要知道一隻菌的身分，得先養菌液抽DNA，再跑16sPCR，之後再經一連串過程才能送定序，從Database裡去比對。但是光觀察各式各樣菌落外觀已讓人目不暇給，夠我們忙了!

(C)彰化縣秀水國民中學 當我們臭在一起小隊 製作

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