首頁鄭家故事關於臭豆腐必吃的五道秘密臭的有學問小廚娘上菜我們的故事專題簡報

 

菌種研究 
篩菌過程 
實驗心得 

 

 

 

篩菌過程

前言

        我們千里迢迢的前往台中做實驗!很幸運的我們有實驗室可以實作~~這要謝謝林宇宏會長幫我們借到實驗室。這項實驗的每一個步驟都必須小心翼翼,稍有疏失,結果就會出現問題。對於操作細節和動作,更是馬虎不得!準備好了嗎?

實驗開始!(圖片皆為自行拍攝)

前往實驗室!!(自行拍攝)

配置培養基

培養基

        我們使用了兩種培養基,第一種是「Nutrient agar(自然培養基)」為廣效型的培養基,適合多數的微生物生長,第二種是「Skim milk agar(脫脂牛奶培養基)」,是為了要篩檢具有分解蛋白質能力的菌種,此培養基本身為乳白色,若該菌種能分解蛋白質,就會在菌落周圍出現透明圈。

↑脫指奶粉、蛋白凍、酵母抽出物、

葡萄糖、洋菜粉(上至下)

↑中興大學的教授調的配方

↑自然培養基的粉末

培養基製作

1. 我們照著配方秤量實驗材料的重量,再將實驗材料倒進玻璃瓶攪拌均勻。

2. 在瓶口包上鋁箔紙,然後將這些玻璃瓶送到「高壓滅菌釜」裡面殺菌。

 ←白色液體為牛奶培養基、  茶色為自然培養基。

 (自行拍攝)

高壓滅菌釜

溫度要121度,殺菌20分鐘。等溫度降到90度,壓力表要指到「0」才可開啟取出。

PS.20分鐘是指溫度升到121度才開始計時。整個過程要等1.5小時左右。

↑桌上好多瓶瓶罐罐,得小心翼翼地動(自行拍攝)

↑要送去蒸汽殺菌釜了(好像裝牛奶的籃子)
↑蒸汽殺菌釜(自行拍攝)

進無菌操作台前一定要先用酒精消毒過!P.S我們自己調配了75%的酒精~~

接下來,我們要把所有實驗會需要用到的器材噴上酒精。要確實消毒才能送進無菌操作台!!

↑75%的酒精(自行拍攝)

↑噴酒精(自行拍攝)

倒入培養液

在無菌操作台中將滅菌完成的培養液倒入培養皿中,倒好開UV晾乾30分鐘等待其凝固。

↑晾乾中,滿滿的培養皿(自行拍攝)

↑會長正倒入培養液(自行拍攝)

塗盤

開始在已經凝固的培養基上塗盤。

我們的臭滷水稀釋到十的負八次方!!!因為第一次做臭滷水實驗,並不清楚它養出來的菌數量究竟多少,為了保險起見,我們決定做到十的負八次方。

塗好後,將培養皿以parafilm封起來,培養皿要倒放,如果以後產生水氣,就不會流到培養基上,影響結果。

↑將培養皿標上日期、稀釋倍數等資訊(自行拍攝)

↑上:Parafilm封口膜。下:滅菌貼。(自行拍攝)

培養

培養環境

        培養的環境須維持在28度,因為我們沒有專業的培養箱,所以我們使用電暖爐加上溫度控制器來維持28度的培養環境~利用身邊現有的物件,來解決眼前的困難,只要溫度降低,電暖爐就會啟動加熱,一到達溫度便停止。

切記!!培養皿要倒放!!!

↑滿滿的培養皿(自行拍攝)

↑調節溫度的暖爐(自行拍攝)

↑維持28度(自行拍攝)

結果

        這些就是我們培養出來的菌~令人驚奇!培養皿上產生了很多小水珠!!有倒放,有保庇,果然按照正確步驟很重要,否則辛苦實驗了一整天的心血就毀了~真的長的超級多,肉眼其實可以分辨出來它們的不同,但光是從照片看,沒辦法看的很清楚!

菌落數量

        培養皿上有綠的,有藍的,還有粉色的,很多很多!!每一個菌落都是由一個細菌不斷分裂長成一個菌落,當稀釋倍數越大,菌落就越來越少,計算菌數時,要選菌落數25-250的來計算,計算方式:(菌落數×稀釋倍數×10)即可得到菌數(CFU/ml)(CFU, colony forming unit)。舉例來說,假設稀釋倍數10的負3次方那盤菌落數60顆,當初加菌液0.1ml去塗盤,所以原菌數為60×1000×10=600000(CFU/ml)…我們挑了一些菌落數適當的稀釋倍數來做觀察和計算。

菌落形態觀察

        我們使用學校的解剖顯微鏡來觀察菌落。都是小水珠!!我們試圖尋找那些藍點、綠點,但顯微鏡底下看起來有色差,所以還是找不太到。老師好不容易借到一台好一點的高級相機,能夠把這些菌落拍下來。菌落外觀有的是圓形光滑,有的是根狀。

↑長微生物的培養皿(自行拍攝) ↑菌落放大(自行拍攝) ↑右上有透明圈

後記

       但礙於時間與實驗設備,很可惜無法再做二階段的測試觀察,不過,第一次自己把菌養出來已經讓人很驚奇了,也知道原來設計實驗和操作實驗有那麼多眉眉角角,真是不容易啊,不過也很有成就感,希望以後有機會能繼續研究下去。雖然我們無法得知那是什麼菌,老師說,要知道一隻菌的身分,得先養菌液抽DNA,再跑16sPCR,之後再經一連串過程才能送定序,從Database裡去比對。但是光觀察各式各樣菌落外觀已讓人目不暇給,夠我們忙了!

 

(C)彰化縣秀水國民中學 當我們臭在一起小隊 製作

圖片若有引用皆有標上來源